JDB电子酶联免疫吸附试验技术服务
酶联免疫吸附试验(ELISA)技术服务:各类酶联免疫吸附试验的检测、酶联黑点图像的分析、克隆形成自动分析、溶血黑点尝试、病毒斑等。
免疫酶技术(immunoenzymatic technique) 最早利用的免疫酶技术是免疫酶组织化学染色,即用象征的抗体与标本中的抗原产生特异性结合,当参与酶的底物时,在酶的作用下经一系列生化反映产生有色物质,借助光镜作出定位判断。目前,利用最宽泛的是酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)。该法特异性强,敏感性高,既可检测抗体,又能测定可溶性抗原。ELISA常选取的酶为辣根过氧化物酶(hosradish peroxidase,HRP),其底物是二氨基苯胺(DAB),底物被分化则呈棕褐色,可目测或借助酶标仪比色。
酶联免疫吸附测定enzyme linked immunosorbent assay(简写ELISA)指将可溶性的抗原或抗体结合到聚苯乙烯等固相载体上,利用抗原抗体结合专一性进行免疫反映的定性和定量检测步骤。
ELISA是将抗原与抗体免疫反映的特异性,同酶的高效催化作用相结合,而成立的一种非放射性象征免疫检测技术D芄欢ㄐ曰蚨考觳馓逡褐械陌肟乖⒖乖涂固。该技术用化学步骤使酶与抗原或抗体結合天生酶象征物,或通过免疫步骤将酶与抗酶抗体相结合天生酶抗体结合物。
酶联免疫吸附试验(Elisa)的根基道理有三条:
(1)抗原或抗体能以物理性地吸附于固相载体表表,可能是蛋白和聚苯乙烯表表间的疏水性部门相互吸附,并维吃熹免疫学活性;
(2)抗原或抗体可通过共价键与酶衔接形成酶结合物,而此种酶结合物仍能维吃熹免疫学和酶学活性;
(3)酶结合物与相应抗原或抗体结合后,可凭据参与第五的色彩反映来判定是否有免疫反映的存在,并且色彩反映的深浅是与标本中相应抗原或抗体的量成正比例的,因而,能够按底物显色的水平显示试验了局。
酶联免疫分析用抗原与抗体的特异反映将待测物与酶衔接,而后通过酶与底物产生色彩反映,用于定量测定。测定的对象可所以抗体也可所以抗原。
酶联免疫分析测定步骤:重要钻研步骤有间接法(常用于检测抗体)/双抗体夹心法(常用于检测抗原)/抗原竞争法(既可检测抗原,亦可检测抗体)。
1、测定抗体的间接法
a.将抗原吸附于固相载体表表,洗涤除去未吸附的抗原。
b.加抗体,保温,形成抗原—抗体复合物洗涤除去其余的杂蛋白。
c.加酵标抗抗体,保温,洗涤。
d.参与底物,测定底物的降解量二抗体量。
2、测定抗原的双抗体夹心法
首先将特异抗体的免疫球蛋白吸附在反映板凹孔内,洗涤除去未吸附的抗体,参与含有抗原的待测溶液,保温形成抗原—抗体复合物,洗涤除去杂蛋白后再加上述特异抗体,由于抗原是多价的并未被抗体鼓和,经保温则可形成抗体—抗原—抗体复合物,洗涤后加酶标抗抗体,保温洗涤后加底物呈色,遏制酶活性,比色测定抗原量。
3、测定抗原的竞争法
将含有特异抗体的免疫球蛋白吸附在两份一样的载体(甲)和(乙)中,而后在(甲)中参与酶标抗原和待测抗原,(乙)中只加酶标抗原,其浓度一样于(甲)中参与的酶标抗原的浓度,保温洗涤后加底物呈色。待测液中未知抗原量愈多,则酶标抗原被结合的量就愈少,有色产品就愈少,以此便可测出未知抗原的量,即蹬宗(甲)与(乙)底物降解量的差值。
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